Dynamis™ AGT™ 培養基 1L的步驟

我在直接使用Dynamis AGT培養基培養CHO細胞的過程中遇到困難。我該如何處理？

請參考如下的逐步適應步驟：如果您在切換至某一比例時培養時遇到問題，請以前面的比例進行傳代2-3次。

1.對培養在含5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基中的CHO細胞進行逐步適應培養時，請使用3×10E5–4×10E5 活性細胞/mL的接種密度。
2.使用Countess自動細胞計數儀監控細胞生長情況，直至活性細胞密度達到≥1×10E6個細胞/mL。
3.按照Dynamis AGT培養基：原始培養基的溶液25：75的比例來稀釋細胞。我們推薦以原始比例的培養基培養一份細胞備份，直至新比例的培養基獲得成功。在每一次后續傳代時，使用比例逐漸增加的DynamisAGT 培養基溶液稀釋細胞（Dynamis AGT培養基：原始培養基=25：75,50：50,75：25,90：10，最后是100%的Dynamis AGT培養基）。每一步驟都可能需要數次傳代，以獲得穩定的生長效果。
4.在100%的Dynamis AGT培養基中幾次傳代之后，活細胞計數在接種后3-4天內可達到至少2×10E6個細胞/mL，細胞存活率在85%以上。達到這一階段，我們認為細胞適應了 Dynamis AGT培養基。

Dynamis AGT 培養基（貨號 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）推薦哪些飼喂補充劑？

我們建議將 EfficientFeed A+、B+ 和/或 C+ AGT 補充劑與 Dynamis AGT 培養基（貨號 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）一起使用，以最大限度地提高滴度。我們建議先嘗試 EfficientFeed C+ AGT 補充劑（貨號 A2503101、A2503104、A2503105）和 EffiientFeed C+ 2X 補充劑（貨號 A3937601、A3937602），如果培養后期比生產力下降，請嘗試添加 FunctionMAX 滴度增強劑（貨號 A1501001、A1501002）。對于未補充補料補充劑（如 EfficientFeed 補充劑）的培養物，在達到半峰細胞密度之前不應添加補充劑。

注意：在沒有補料的情況下培養細胞進行補料分批生產時，我們建議您不要讓培養物中的葡萄糖水平低于 2g/L，并根據需要補充葡萄糖

Dynamis AGT 培養基（貨號 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）是否需要補充才能使用？

當使用 Dynamis AGT 培養基（貨號 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）培養谷氨酰胺合成酶 （GS） 基因表達系統（GS-CHO 表達系統）以外的 CHO 細胞系時，添加 2-8 mM L-谷氨酰胺或等量的 GlutaMAX 補充劑（Cat.建議使用35050079號，35050061）。

注意：我們建議您根據需要補充葡萄糖，以免培養物中的葡萄糖水平低于 2g/L

我無法將我的 CHO 細胞直接適應 Dynamis AGT 培養基。我該怎么辦？

請參考下面顯示的順序適應程序。如果您無法超過一定比例，請以之前的比例再傳代細胞 2-3 次。

1. 在常規 5-10% 補充血清培養基或其他無血清培養基中生長的 CHO 細胞的順序適應期間，使用 3 X 10E5-4 X 10E5 活細胞/mL 的接種密度。
2. 使用 Countess 自動細胞計數儀監測細胞生長，直到活細胞密度達到大于或等于 1 X 10E6 個細胞/mL。
3. 使用完整的 Dynamis AGT 培養基與原始培養基的 25：75 比例稀釋細胞。我們建議在原始比率培養基中維護備份培養物，直到使用新比率培養基取得成功。在隨后的每次傳代中，用 Dynamis AGT 培養基與原始培養基的比例逐步增加稀釋細胞（25：75、50：50、75：25、90：10，然后是 100% Dynamis AGT 培養基）。每一步可能需要多次傳代才能實現持續生長。
4. 在 100% Dynamis AGT 培養基中多次傳代后，活細胞計數應在接種培養后 3-4 天內達到至少 2 X 10E6 個細胞/mL，活力率為 ≥85%。在這個階段，該培養物被認為適應了 Dynamis AGT 培養基。