Dynamis™ AGT™ 培養(yǎng)基 1L的步驟

我在直接使用Dynamis AGT培養(yǎng)基培養(yǎng)CHO細(xì)胞的過程中遇到困難。我該如何處理？

請參考如下的逐步適應(yīng)步驟：如果您在切換至某一比例時培養(yǎng)時遇到問題，請以前面的比例進(jìn)行傳代2-3次。

1.對培養(yǎng)在含5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基中的CHO細(xì)胞進(jìn)行逐步適應(yīng)培養(yǎng)時，請使用3×10E5–4×10E5 活性細(xì)胞/mL的接種密度。
2.使用Countess自動細(xì)胞計數(shù)儀監(jiān)控細(xì)胞生長情況，直至活性細(xì)胞密度達(dá)到≥1×10E6個細(xì)胞/mL。
3.按照Dynamis AGT培養(yǎng)基：原始培養(yǎng)基的溶液25：75的比例來稀釋細(xì)胞。我們推薦以原始比例的培養(yǎng)基培養(yǎng)一份細(xì)胞備份，直至新比例的培養(yǎng)基獲得成功。在每一次后續(xù)傳代時，使用比例逐漸增加的DynamisAGT 培養(yǎng)基溶液稀釋細(xì)胞（Dynamis AGT培養(yǎng)基：原始培養(yǎng)基=25：75,50：50,75：25,90：10，最后是100%的Dynamis AGT培養(yǎng)基）。每一步驟都可能需要數(shù)次傳代，以獲得穩(wěn)定的生長效果。
4.在100%的Dynamis AGT培養(yǎng)基中幾次傳代之后，活細(xì)胞計數(shù)在接種后3-4天內(nèi)可達(dá)到至少2×10E6個細(xì)胞/mL，細(xì)胞存活率在85%以上。達(dá)到這一階段，我們認(rèn)為細(xì)胞適應(yīng)了 Dynamis AGT培養(yǎng)基。

Dynamis AGT 培養(yǎng)基（貨號 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）推薦哪些飼喂補(bǔ)充劑？

我們建議將 EfficientFeed A+、B+ 和/或 C+ AGT 補(bǔ)充劑與 Dynamis AGT 培養(yǎng)基（貨號 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）一起使用，以最大限度地提高滴度。我們建議先嘗試 EfficientFeed C+ AGT 補(bǔ)充劑（貨號 A2503101、A2503104、A2503105）和 EffiientFeed C+ 2X 補(bǔ)充劑（貨號 A3937601、A3937602），如果培養(yǎng)后期比生產(chǎn)力下降，請嘗試添加 FunctionMAX 滴度增強(qiáng)劑（貨號 A1501001、A1501002）。對于未補(bǔ)充補(bǔ)料補(bǔ)充劑（如 EfficientFeed 補(bǔ)充劑）的培養(yǎng)物，在達(dá)到半峰細(xì)胞密度之前不應(yīng)添加補(bǔ)充劑。

注意：在沒有補(bǔ)料的情況下培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)料分批生產(chǎn)時，我們建議您不要讓培養(yǎng)物中的葡萄糖水平低于 2g/L，并根據(jù)需要補(bǔ)充葡萄糖

Dynamis AGT 培養(yǎng)基（貨號 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）是否需要補(bǔ)充才能使用？

當(dāng)使用 Dynamis AGT 培養(yǎng)基（貨號 A2617501、A2617502、A2617503、A2617504）培養(yǎng)谷氨酰胺合成酶 （GS） 基因表達(dá)系統(tǒng)（GS-CHO 表達(dá)系統(tǒng)）以外的 CHO 細(xì)胞系時，添加 2-8 mM L-谷氨酰胺或等量的 GlutaMAX 補(bǔ)充劑（Cat.建議使用35050079號，35050061）。

注意：我們建議您根據(jù)需要補(bǔ)充葡萄糖，以免培養(yǎng)物中的葡萄糖水平低于 2g/L

我無法將我的 CHO 細(xì)胞直接適應(yīng) Dynamis AGT 培養(yǎng)基。我該怎么辦？

請參考下面顯示的順序適應(yīng)程序。如果您無法超過一定比例，請以之前的比例再傳代細(xì)胞 2-3 次。

1. 在常規(guī) 5-10% 補(bǔ)充血清培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基中生長的 CHO 細(xì)胞的順序適應(yīng)期間，使用 3 X 10E5-4 X 10E5 活細(xì)胞/mL 的接種密度。
2. 使用 Countess 自動細(xì)胞計數(shù)儀監(jiān)測細(xì)胞生長，直到活細(xì)胞密度達(dá)到大于或等于 1 X 10E6 個細(xì)胞/mL。
3. 使用完整的 Dynamis AGT 培養(yǎng)基與原始培養(yǎng)基的 25：75 比例稀釋細(xì)胞。我們建議在原始比率培養(yǎng)基中維護(hù)備份培養(yǎng)物，直到使用新比率培養(yǎng)基取得成功。在隨后的每次傳代中，用 Dynamis AGT 培養(yǎng)基與原始培養(yǎng)基的比例逐步增加稀釋細(xì)胞（25：75、50：50、75：25、90：10，然后是 100% Dynamis AGT 培養(yǎng)基）。每一步可能需要多次傳代才能實現(xiàn)持續(xù)生長。
4. 在 100% Dynamis AGT 培養(yǎng)基中多次傳代后，活細(xì)胞計數(shù)應(yīng)在接種培養(yǎng)后 3-4 天內(nèi)達(dá)到至少 2 X 10E6 個細(xì)胞/mL，活力率為 ≥85%。在這個階段，該培養(yǎng)物被認(rèn)為適應(yīng)了 Dynamis AGT 培養(yǎng)基。